Полный справочник медицинской аппаратуры - Коллектив авторов - Страница 41

Технология проточной цитометрии имеет ряд преимуществ перед описанными выше методиками.

1. Если изображение в микроскопе является двумерной проекцией клетки, то индикатриса светорассеяния является своего рода одномерным отображением клетки и содержит не меньше информации о характеристиках клетки. В случае каких-либо патологических явлений в клетке можно создавать банк данных индикатрис светорассеяния патологических клеток, точно так же как это уже сделано для микроскопных изображений, и не прибегая к микроскопу в реальном времени производить анализ.

2. Благодаря развиваемым подходам в решении обратной задачи светорассеяния контроль качества работы прибора может осуществляться ежедневным измерением калибровочных сфер определенного размера, а не по крови здорового донора и контрольных измерений калибровочной крови.

3. Использование большого количества информации, содержащейся в индикатрисе светорассеяния, повышает способность проточных цитометров к дифференцировке клеток крови по сравнению с другими гематологическими анализаторами. Благодаря этому в анализах можно исключить использование некоторых химических реагентов.

4. Кинетические измерения индикатрис светорассеяния клеток в процессе реагирования на какое-либо воздействие в сочетании с развиваемой кинетической моделью данного процесса позволяют определять многие дополнительные характеристики клеток. Так, при измерении процесса лизиса и сферизации эритроцитов можно измерить их дополнительные характеристики, такие как площадь, проницаемость и жесткость мембраны.

В настоящее время все проточные цитометры по производительности можно разделить на две группы:

1) простые в использовании и обслуживании аппараты, которые могут измерять флуоресценцию при двух и более длинах волн и светорассеяние под углом около 10° (малоугольное прямое рассеяние) и 90°;

2) большие клеточные анализаторы, которые не только измеряют пять и более клеточных или ядерных параметров, но и сортируют частицы с заданным набором этих параметров.

Сегодня проточная цитометрия – ведущий метод в клинической иммунологии. В клинической гематологии он может быть использован для решения следующих задач:

1) иммунофенотипирования лимфоцитов, включая определение количества СD4, СD8 клеток и даже ТН1 и ТН2 (по продукции специфических цитокинов);

2) анализа процессов клеточной активации на основе определения маркеров ранней активации: СБ25 (рецептор интерлейки-на-2), СD38, СD69, СD71 (трансферриновый рецептор), СD95 (антиген апоптоза), СD122, анти-HLA-DR;

3) определения маркеров пролиферативной активности клеток иммунной системы (Ki-67, PCNA, Cyclin D3);

4) оценки внутриклеточной продукции цитокинов различными клеточными популяциями;

5) иммунофенотипирования острых лейкозов и лимфом;

6) анализа клеточного цикла с определением распределения клеточной популяции по фазам цикла (ДНК-цитометрия);

7) детекции и наблюдения минимальной резидуальной болезни (МRD);

8) анализа маркеров апоптоза (аннексина V, CD95 Fas/APO-1, CD95L, Bcl-2, P53).

В качестве примера устройств, использующих в своей работе методику проточной цитометрии, может послужить проточный цитометр EPICS 4 XL фирмы Beckman Coulter (США).

Проточный цитометр EPICS 4 XL

Общие характеристики

Проточный цитометр EPICS 4 XL – позволяет работать с четырехцветной меткой, т. е. определять в одной пробе сразу 4 параметра с использованием одного источника света – аргонового лазера. Это существенно удешевляет конфигурацию прибора и облегчает задачу оператора. Устраняется необходимость введения временной задержки, устанавливаемой при проведении четырехцветного анализа на приборе с двумя лазерами.

Скорость анализа составляет до 10 000 клеток в секунду, что позволяет получить статистически достоверную информацию о морфологии клеток, их поверхностных антигенах, внутриклеточных ферментах, содержании ДНК и т. д.

Производительность прибора – 90 образцов в ч. Станции Q-Prep и DNA-Prep позволяют автоматизировать пробоподготов-ку для иммунофенотипирования лейкоцитов и ДНК-анализа. Автоматическое устройство Q-Prep проводит приготовление суспензии клеток для анализа за 35 с. Использование безотмывочной технологии лизиса эритроцитов цельной крови позволяет осуществлять подсчет абсолютного количества клеток с помощью референсных частиц.

Прибор имеет встроенную программу контроля качества QC, позволяющую проводить ежедневный мониторинг корректности настроек прибора и качества используемых реагентов, с построением графиков Леви-Дженингса. Проточный цитометр EPICS 4XL является открытой системой, позволяющей работать с реагентами любых фирм, включая отечественные. В стоимость входит: инсталляция прибора, гарантийное обслуживание в течение 12 месяцев, обучение специалистов заказчика правилам эксплуатации, методам работы на приборе и обработке результатов непосредственно на рабочем месте.

Возможности использования прибора для клинико-диагностических целей:

1) анализ субпопуляций клеток периферической крови (иммуно-фенотипирование, мониторинг ВИЧ-инфицированных);

2) анализ пролиферативного статуса клеток (изучение реакции бласттрансформации, определение активационных маркеров клеток);

3) изучение апоптоза и фагоцитоза;

4) типирование лейкозов;

5) типирование клеток в онкологии, в том числе солидных опухолей с использованием тканеспецифических маркеров;

6) определение количества стволовых (СБ34+) клеток;

7) измерение содержания ДНК и анализ плоидности клеток;

8) анализ клеточного цикла;

9) автоматический подсчет относительного и абсолютного количества клеток с использованием референсных частиц;

10) анализ тромбоцитов;

11) подсчет ретикулоцитов;

12) определение внутриклеточных ферментов, интерлейкинов, Са2+, рН;

13) проведение кинетических измерений.

Техническая спецификация прибора:

1) число определяемых параметров – 6;

2) прямое и боковое светорассеяние (FSC, SSC) четыре параметра флуоресценции (FLI – FLIV).

Режим работы:

1) измерение четырех параметров флуоресценции и двух параметров светорассеяния;

2) подсчет абсолютного и относительного количества частиц в ходе измерения;

3) возможность проведения кинетических измерений.

Оптика:

1) аргоновый лазер (488 нм), 15 mW с воздушным охлаждением;

2) детекторы: два полупроводниковых диода на каналах светорассеяния, четыре фотоумножителя на каналах флуоресценции. Фильтры: нейтральный фильтр 1.0 ОD, фильтры пропускания:

525 нм, 575 нм, 620 нм и 675 нм; все оптические фильтры легкодоступны и могут заменяться пользователем.

Проточная кювета:

1) закрытая кварцевая кювета; программа предусматривает возможность автоматической очистки проточной кюветы без прерывания цикла анализа;

2) разрешение на каналах светорассеяния и флуоресценции: 2 % CV (с использованием флуоресцентных калибровочных частиц для всех каналов).

Обработка сигнала:

1) количество детектируемых сигналов: 2 параметра светорассеяния, 4 параметра флуоресценции;

2) один дополнительный усилитель для дискриминации дублетов;

3) полная компенсация на всех четырех каналах флуоресценции, возможность установки значений компенсации на всех каналах без прерывания цикла анализа;

4) усиление сигнала: линейное усиление сигнала в диапазоне 4 декад с возможностью логарифмического преобразования;

5) полное цифровое преобразование сигналов с помощью микропроцессора;

6) цифровое логарифмическое (4 декады) преобразование с компенсацией сигналов флуоресценции;

7) разрешение сигналов: 1024 канала для всех параметров.

Исследовать систему гемостаза можно с помощью разнообразных автоматизированных устройств. К таким устройствам относятся: