Полный справочник медицинской аппаратуры - Коллектив авторов - Страница 39

Все реакции имеют свой регламент, обусловленный оптимальным соотношением вступающих в реакцию компонентов, поэтому чем мельче шаг дозирования (как пробы, так и реагента), тем с большей вероятностью можно выдержать точный регламент реакции на малых объемах. Более того, при одинаковой возможной загрузке прибора (например, от 300 мкл реагента на анализ) более экономичной является такая конструкция дозатора, при которой можно установить шаг в 1 мкл, а не в 5 или 10 мкл для реагента, и 0,5–0,7 мкл, а не 1–1,5 мкл для пробы, так как это оставляет пользователю возможность работы с дробными объемами и не вынуждает его увеличивать загрузку реагента, например до 400 мкл, только потому, что невозможно изменить дозирование пробы с 4 на 4,5 мкл.

Таким образом, для оптимального выбора автоматического анализатора необходимо оценивать не только его аналитические возможности и математическое обеспечение, но и конструкцию основных узлов, оказывающую немалое влияние как на риск возникновения системных и случайных ошибок, так и на экономичность расхода реагентов.

Для адекватного выбора анализатора существенное значение имеет не только его производительность и «интеллектуальность», но и соответствие его нуждам конкретной лаборатории и конкретного лечебного учреждения. Во-первых, необходимо определить предполагаемую загрузку прибора (поток пациентов). Во-вторых – учесть возможности штатного расписания и квалификацию персонала. В-третьих – определить, какие именно тесты и в каком количестве предполагается проводить. С этой целью мы предлагаем следующие таблицы выбора (см. табл. 2, 3).

Таким образом, полуавтоматический биохимический анализатор может быть оптимально использован при незначительном потоке пациентов или в случае проведения многочисленных анализов одного или нескольких сходных параметров.

Полностью автоматизированная система необходима при потоке более 10 пациентов в день, в особенности – при широком профиле назначаемых тестов, или при проведении тестов, требующих дополнительного обсчета и верификации результатов.

Существуют две методики подсчета форменных элементов крови: рутинный с использованием камеры Горяева и автоматизированный с использованием автоматических счетчиков и анализаторов.

Подсчет в счетной камере. В данном случае подсчет форменных элементов крови проводят под микроскопом в строго определенном количестве квадратов камеры Горяева. Затем пересчитывают число форменных элементов на 1 мкл и 1 л крови с учетом объема квадратов и разведения крови.

Для подсчета эритроцитов берут 0,02 мл крови, предварительно разведенной в 200 раз в 4,0 мл изотонического раствора натрия хлорида.

Счетная камера представляет собой толстую стеклянную пластину, с расположенным в центре углублением, равным 0,1 мм. На дне камеры нанесены 2 сетки Горяева, разграниченные поперечной канавкой. Сбоку от сеток расположены стеклянные прямоугольные пластины, к которым притирается шлифованное покровное стекло.

Каждая сетка Горяева состоит из 225 больших квадратов, 25 из которых разделены еще на 16 малых квадратов каждый. Сторона большого квадрата равна 0,2 мм, сторона малого квадрата – 0,05 мм. Соответственно площадь большого квадрата составляет 0,04 мм², малого квадрата – 0,0025 мм². Если учитывать глубину камеры, равную 0,1 мм, то объем одного малого квадрата сетки Горяева составит 2,5 х 10⁴ мкл (см. рис. 6).

Рис. 6. Сетка Горяева для подсчета форменных элементов

Перед заполнением кровью счетную камеру и покровное стекло необходимо тщательно протереть и высушить. Большими пальцами покровное стекло плотно прижимают к боковым пластинам камеры и слегка передвигают его вверх и вниз до тех пор, пока не появятся радужные полосы («ньютоновые кольца»). Только при соблюдении этих условий достигается должный объем камеры.

Перед тем как заполнить камеру взвесью крови в изотоническом растворе необходимо содержимое пробирки несколько раз встряхнуть. Пипеткой набирают небольшой объем взвеси крови и выпускают несколько капель на фильтровальную бумагу. После чего переносят каплю разведенной крови на край покровного стекла, следя за тем, чтобы кровь равномерно заполняла всю поверхность камеры с сеткой, не затекая в боковые бороздки. Если это случится, то излишки крови необходимо удалить фильтровальной бумагой.

Подсчет эритроцитов проводят при малом увеличении микроскопа.

Эритроциты подсчитывают в 5 расположенных по диагонали сетки квадратах, которые в свою очередь разделены на малые, то есть подсчет ведется в 80 малых квадратах. Для этого под микроскопом находят верхний левый большой квадрат сетки (разделенный на 16 малых) и начинают подсчитывать число эритроцитов с него. При этом целесообразно придерживаться определенной последовательности подсчета эритроцитов: передвигаться из одного малого квадрата в другой по горизонтали, например один ряд – справа налево, другой ряд – слева направо и т. д., как показано на рисунке.

В каждом малом квадрате подсчитывают эритроциты, находящиеся внутри него, а также расположенные, например, на левой и верхней границах квадрата, пропуская эритроциты, лежащие на нижней и правой границах. Это позволяет добиться того, чтобы клетки, расположенные на границе квадратов, не считались дважды.

Количество эритроцитов в 1 мкл (1 мм³) крови рассчитывают по формуле:

X = a х 200/b х 80,

где Х– число эритроцитов в 1 мкл крови, а – число сосчитанных эритроцитов, Ь – объем малого квадрата (2,5 х 10^-4 мкл), 200 – разведение крови, 80 – число малых квадратов, в которых производился счет.

Если ввести в эту формулу значение объема одного малого квадрата сетки Горяева, можно получить упрощенную формулу подсчета форменных элементов:

Х = а х 200/80 х 2,5 х 10^-4 = а х 200/200 х 10^-4 = а/10^-4 = а х 10⁴.

Количество эритроцитов в 1 мкл (Х)равно числу форменных элементов крови, подсчитанных в 80 малых квадратах, умноженному на 10⁴:

Х= а х 10⁴.

Например, в 5 больших квадратах (80 малых) сосчитано 456 эритроцитов. Тогда количество эритроцитов в 1 мкл составит 4 560 000, или примерно 4,5 х 10⁶/мкл. Учитывая, что в 1 л жидкости содержится 10⁶ мкл, число подсчитанных эритроцитов можно выразить следующим образом: 4,5 х 10¹²/л. Это последнее обозначение числа форменных элементов является в последние годы общепринятым.

Подсчет количества лейкоцитов в счетной камере проводят аналогичным образом. Однако каплю крови (0,02 мл) разводят в 20 раз 3–5%-ным раствором уксусной кислоты (0,4 мл), гемоли-зирующей эритроциты. Затем разведенной взвесью клеток заполняют счетную камеру Горяева, как описано выше. Заполненную камеру оставляют на 1 мин для оседания лейкоцитов, после этого устанавливают ее на столик микроскопа и при малом увеличении подсчитывают лейкоциты в 100 больших квадратах сетки Го-ряева, не разделенных на малые квадраты и полосы. Так же как и при подсчете эритроцитов, считают клетки, расположенные внутри квадрата и на его левой и верхней границах.

Расчет общего количества лейкоцитов проводят по формуле:

Х = а х 20/100 х Ь,

где Х – число лейкоцитов в 1 мкл крови;

а – число посчитанных лейкоцитов;

Ь – объем одного большого квадрата (4,0 х 10^-3 мкл);

20 – разведение крови;

100 – число больших квадратов, в которых производился счет.